Transmission electron microscopy in oral cytopathology: a pilot study / Microscopia eletrônica de transmissão em citopatologia bucal: um estudo piloto

Introduction: Cytopathology is a collection method that allows cell analysis through the different techniques. The oral mucosa exfoliated cells observation demonstrates morphological, biochemical and/or molecular aspects depending on the type of processing of the sample. Aim: This study tested the use of oral cytopathology associated with transmission electron microscopy (TEM) to observe the morphology of cells, mainly in relation to the cell nucleus, the cytoplasmic membrane, and cell junctions. Materials and Methods: Exfoliated epithelial cells from the oral mucosa were analyzed by TEM from individuals exposed to tobacco and alcohol, with leukoplakia or with a histopathological diagnosis of squamous cell carci-noma. Results: The cytoplasmic cell-cell junctions in the malignant samples lost the characteristic irregular pattern formed by the numerous interdigitations and the junctional process of normal cells and started to present a straight cytoplasmic surface. The nuclei of cells from leukoplakia and squamous cell carcinoma samples showed heterogeneous staining, while non-lesional cells were homogeneous. Discussion: The analysis of oral cytopathological smears by TEM contributes to the un-derstanding of the changes that occur during the process of malignancy of the oral mucosa, especially with regard to the cytoplasmic membrane and intercellular junctions. Conclusion: TEM may be a good analytical method to investigate morphological changes in exfoliated cells of the oral epithelium.

Introdução: A citopatologia é um método de coleta que permite a análise celular por meio de diferentes técnicas. A observação das células esfoliadas da mucosa bucal demonstra aspectos morfológicos, bioquímicos e/ou moleculares dependendo do tipo do processamento empregado. Objetivo: Este estudo testou o emprego da técnica de citopatologia bucal associada à microscopia eletrônica de transmissão (MET) para observar a morfologia das células, principalmente com relação à membrana citoplasmática, as junções celulares e ao núcleo da célula. Materiais eMétodos: Células epiteliais esfoliadas da mucosa bucal foram analisadas por MET de indivíduos expostos a tabaco e álcool, apresentando leucoplasia ou com diagnóstico de carcinoma espinocelular. Resultados:As junções citoplasmáticas célula-célula nas amostras malignas perderam o padrão irregular característico formado pelas inúmeras interdigitações e o processo juncional das células normais e passaram a apresentar uma superfície citoplasmática reta. O núcleo das células das amostras de leucoplasia e do carcinoma espinocelular apresentou coloração heterogênea, enquanto as células não lesionais foram homogêneas. Discussão: A análise de esfregaços citopatológicos bucais por MET contribui para o entendimento das alterações que ocorrem durante o processo de malignidade da mucosa bucal, principal-mente no que diz respeito à membrana citoplasmática e as junções intercelulares. Conclusão: A MET pode ser um bom método analítico para investigar alterações morfológicas em células esfoliadas do epitélio bucal.

Ocurrence of pepper yellow mosaic virus and cucumber mosaic virus on Capsicum chinense in the state of Amazonas, Brazil / Ocorrência do pepper yellow mosaic virus e cucumber mosaic virus em Capsicum chinense no estado do Amazonas, Brasil

The habanero chilli pepper, Capsicum chinense is an important crop in the Amazon Basin, mainly grown by small-scale producers. Capsicum chinense plants in an experimental field in the northern Brazilian state of Amazonas were found exhibiting characteristic symptoms of viral infection. Leaf sap from symptomatic plants examined under a transmission electron microscope revealed the presence of elongated flexuous particles and isometric particles. Using molecular assays, the viruses were identified as pepper yellow mosaic virus (PepYMV) and cucumber mosaic virus (CMV). Aphids, identified as Aphis gossypii, were found colonizing the C. chinense plants in the field and may be the vector for both PepYMV and CMV. We report the first occurrence of these viruses infecting C. chinense in the state of Amazonas.

A pimenta-de-cheiro, Capsicum chinense é uma cultura importante na Bacia Amazônica, cultivada principalmente por pequenos produtores. Plantas de C. chinense em um campo experimental localizado no norte do estado brasileiro do Amazonas, foram encontradas apresentando sintomas característicos de infecção viral. Extratos de amostras de folhas sintomáticas examinados ao microscópio eletrônico de transmissão revelaram a presença de partículas alongadas e flexuosas e de partículas isométricas. Análises moleculares permitiram identificar a presença do pepper yellow mosaic virus (PepYMV) e do cucumber mosaic virus (CMV). Pulgões, identificados como Aphis gossypii foram encontrados colonizando pimenteiras-de-cheiro neste campo experimental e podem representar o provável vetor de PepYMV e CMV. Este trabalho relata a primeira ocorrência desses vírus infectando C. chinense no estado do Amazonas.

Effect of nanotechnology in self-etch bonding systems on the shear bond strength of stainless steel orthodontic brackets

ABSTRACT Objective: To evaluate the effect of silica dioxide (SiO2) nanofillers in different bonding systems on shear bond strength (SBS) and mode of failure of orthodontic brackets at two experimental times. Methods: Ninety-six intact premolars were divided into four groups: A) Conventional acid-etch and primer Transbond XT; B) Transbond Plus self-etch primer; and two self-etch bonding systems reinforced with silica dioxide nanofiller at different concentrations: C) Futurabond DC at 1%; D) Optibond All-in-One at 7%. Each group was allocated into two subgroups (n = 12) according to experimental time (12 and 24 hours). SBS test was performed using a universal testing machine. ARI scores were determined under a stereomicroscope. Scanning electron microscopy (SEM) and transmission electron microscopy (TEM) were used to determine the size and distribution of nanofillers. One-way ANOVA was used to compare SBS followed by the post-hoc Tukey test. The chi-square test was used to evaluate ARI scores. Results: Mean SBS of Futurabond DC and Optibond All-in-One were significantly lower than conventional system, and there were no significant differences between means SBS obtained with all self-etch bonding systems used in the study. Lower ARI scores were found for Futurabond DC and Optibond All-in-One. There was no significant difference of SBS and ARI obtained at either time points for all bonding systems. Relative homogeneous distribution of the fillers was observed with the bonding systems. Conclusion: Two nanofilled systems revealed the lowest bond strengths, but still clinically acceptable and less adhesive was left on enamel. It is advisable not to load the brackets immediately to the maximum.

RESUMO Objetivo: avaliar o efeito das nanopartículas de dióxido de silício (SiO2), presentes em diferentes sistemas adesivos, na resistência ao cisalhamento da colagem (RAC) e no modo de fratura de braquetes ortodônticos avaliados em dois momentos. Métodos: noventa e seis pré-molares intactos foram divididos em quatro grupos: A) condicionador ácido convencional e primer Transbond XT; B) primer autocondicionador Transbond Plus; e dois sistemas adesivos autocondicionantes reforçados com nanopartículas de dióxido de silício em diferentes concentrações, C) DC Futurabond a 1%; D) Optibond All-In-One a 7%. Cada grupo foi dividido em dois subgrupos (n = 12), de acordo com o tempo para realização do teste (12 e 24 horas). O teste da RAC foi realizado em uma máquina universal de ensaios. Os resultados do índice de adesivo remanescente foram determinados com um estereomicroscópio. Para determinar o tamanho e a distribuição das nanopartículas, utilizou-se microscopia eletrônica de varredura (MEV) e microscopia eletrônica de transmissão (MET). O ANOVA a um critério foi usado para comparar a RAC, seguido pelo teste post-hoc de Tukey. O teste qui-quadrado foi usado para avaliar os índices de adesivo remanescente. Resultados: a RAC média do Futurabond DC e do Optibond All-In-One foi menor do que a do sistema convencional, de forma estatisticamente significativa; e não houve diferença estatisticamente significativa entre os níveis médios de RAC obtidos nos sistemas adesivos autocondicionantes avaliados nesse estudo. Os menores índices de adesivo remanescente foram observados com o Futurabond DC e o Optibond All-In-One. Não houve, entre os sistemas adesivos, diferença significativa na RAC e nos índices de adesivo remanescente obtidos nos dois tempos de aplicação. Foi observada uma distribuição relativamente homogênea das partículas nos sistemas adesivos. Conclusão: os dois sistemas com nanopartículas demonstraram menor RAC, mas ainda aceitável e com o menor índice de adesivo remanescente no esmalte. É, assim, aconselhável não submeter os braquetes à carga máxima logo após a colagem.

Ecophysiological, anatomical and ultrastructural characteristics of Vitex polygama Cham. (Verbenaceae) submitted to different concentrations of fluoride / Características ecofisiológicas, anatômicas e ultraestruturais de Vitex polygama Cham. (Verbenaceae) submetida a diferentes concentrações de flúor

Fluorides released during the manufacture of aluminum, fertilizers, glass and ceramics are considered to be highly toxic to plants, causing damages in relatively small concentrations. This study aimed to evaluate fluoride (F) accumulation and its effects on Vitex polygama Cham. (Verbenaceae) exposed to simulated rain containing potassium fluoride in concentrations of 5, 10, 15 and 20 mg L-1. Vitex polygama presented no visual symptoms of foliar injury and accumulated a relatively small amount of F-, significant only for the treatments with higher concentrations of the pollutant. F- promoted an increase in non-photochemical quenching (qN) and in the coefficient due to non -photochemical extinction (NPQ), which indicates higher dissipation of radiant energy in the heat form. Damages in the chloroplast structure, in cellular membranes and in epicuticular waxes, besides cytoplasm granulation and irregularities in the epidermal cell walls were also detected in plants exposed to the pollutant. The results show a considerable resistance of Vitex polygama to F and reinforce the prognostic value of physiological, anatomical and ultrastructural analysis in the detection of damages caused by the pollutant in the leaf structure of this species.

Fluoretos, liberados durante a manufatura de alumínio, fertilizantes, vidro e cerâmica, são considerados altamente tóxicos para as plantas, causando danos em concentrações relativamente pequenas. Este estudo teve como finalidade avaliar o acúmulo de flúor (F) e seus efeitos sobre Vitex polygama Cham. (Verbenaceae) em plantas expostas a chuva simulada contendo fluoreto de potássio em concentrações de 5, 10, 15 e 20 mg L-1. Vitex polygama não apresentou sintomas visíveis de injúria foliar e acumulou uma quantidade relativamente pequena de F-, significativa apenas para os tratamentos com maiores concentrações do poluente. O F- promoveu aumentos no coeficiente devido à extinção não fotoquímica (qN) e no coeficiente devido à extinção não fotoquímica (NPQ), que indicam maior dissipação de energia radiante na forma de calor. Danos na estrutura dos cloroplastos, em membranas celulares e nas ceras epicuticulares, além de granulação do citoplasma e irregularidades na parede celular de células epidérmicas, foram também detectados em plantas expostas ao poluente. Os resultados demonstram uma considerável resistência de Vitex polygama ao F e reforçam o valor prognóstico de análises fisiológicas, anatômicas e ultraestruturais na detecção de danos causados pelo poluente na estrutura foliar dessa espécie.

A histomorphometric study of unmyelinated fibers of the fibular nerve in Wistar rats / Histomorfometria das fibras amielínicas do nervo fibular em ratos Wistar

ABSTRACT There are few histomorphometric studies on the unmyelinated fibers of the fibular nerve in rats, and the number of experimental studies using this nerve has been increasing in the last years. Sixty-two percent of the endoneurial area from 10 fibular nerves of adult Wistar rats was scanned by electron microscopy, and digitized. The total number of unmyelinated axons (1.882 ± 271) was significantly lesser, and their axon diameters (0.2 µm to 2.8 µm) significantly higher than that determined in previous studies. The histogram peaked at 1 µm. The differences could be due to the nerve sampled area, the number and the age of the animals evaluated, and the laboratory techniques used. This study brings new and referential data to be used in experimental investigations involving histomorphometric evaluation of the rat fibular nerve.

RESUMO Embora o nervo fibular de ratos venha sendo incluído progressivamente em maior número de estudos experimentais nos últimos anos, há poucos estudos a respeito das suas fibras amielínicas. Os nervos fibulares de 10 ratos Wistar adultos foram avaliados através de microscopia óptica e eletrônica. Varredura sistemática através de microscopia eletrônica de transmissão das áreas fasciculares da porção distal no nervo foi realizada. Em média, 62% da área endoneural foi digitalizada. O número total de axônios amielínicos encontrados (1.882 ± 271) foi significativamente menor e as medidas dos diâmetros axonais (0,2 µm a 2,8 µm) maiores do que o determinado em estudos prévios. O pico do histograma foi constituído por fibras de 1µm. As diferenças podem ser devidas à amostragem de maior área endoneural, ao número e à idade dos animais avaliados, e as técnicas laboratoriais utilizadas. Os dados obtidos podem ser considerados referenciais para o nervo fibular de ratos Wistar adultos.

Hiperplasia em túnicas de artérias coronárias de beijupirás criados em sistema offshore / Hyperplasia in tunics of coronary arteries in beijupirá farmed in offshore system

As lesões coronarianas já foram relatadas em espécies de peixes anádromos, com características semelhantes às observadas em aterosclerose humana, mas não em peixes cultivados sem interferência de padrões reprodutivos. Objetivou-se descrever lesões coronarianas em beijupirá (Rachycentron canadum) criado em sistema offshore, em 54 exemplares coletados ao longo do cultivo de oito meses. Amostras de tecido cardíaco de alevinos e juvenis foram submetidas à análise histopatológica e à microscopia eletrônica de transmissão (MET), para visualização de lesões coronarianas, sendo as lâminas histológicas coradas pela técnica de hematoxilina-eosina, ácido periódico de Schiff, alcian blue e reticulina de Gomori. Exames realizados pela fotomicroscopia de luz evidenciaram lesões arteriais caracterizadas por hiperplasia das túnicas íntima e média de artérias coronárias em, respectivamente, 29,63% e 79,63% dos animais, com redução do lúmen arterial. Na MET, foram observadas alterações na estrutura das coronárias com espessamento do endotélio e membrana basal, proliferação de fibroblastos e fibras colágenas, com acúmulo de material lipídico subendotelial, resíduos celulares aderidos à membrana basal e vesículas pinocitóticas com presença de lisossomos isolados. Constatou-se que os peixes da espécie Rachycentron canadum criados em cativeiro desenvolvem lesão arterial do tipo crônica degenerativa inflamatória.

The coronary lesions have been reported in species of anadromous fish with similar characteristics as those observed in human atherosclerosis, but not in farmed fish without interference of reproductive patterns. This study aimed to describe coronary lesions in beijupirá (Rachycentron canadum) farmed in an offshore system, in 54 specimens collected along an eight month cultivation period. Samples of heart tissue of fry and juveniles were subjected to histopathological analysis and transmission electron microscopy (TEM) for visualization of coronary lesions, the histology slides were stained using hematoxylin-eosin, periodic acid Schiffh, alcian blue, and reticulin of Gomori. Examinations performed by light microscopy showed arterial lesions characterized by hyperplasia of the intima and media tunics, respectively in 29.63% and 79.63 % of the animals, with reduced lumen. In TEM changes in the structure of the coronary endothelium and thickening of the basement membrane, proliferation of fibroblasts and collagen fibers, with subendothelial accumulation of lipid material, cellular debris adhering to the basement membrane and presence of pinocytotics vesicles and isolated lysosomes were observed. It has been found that the Rachycentron canadum fish species farmed in captivity develop arterial lesion of the chronic inflammatory degenerative type.

Alterações na morfologia e na viabilidade no desenvolvimento de embriões bovinos fecundados in vitro com sêmen contaminado experimentalmente à Escherichia coli produtora da toxina Shiga stx2 / Changes in morphology and viability on the development of bovine embryos in vitro fertilized with experimentally contaminated semen to Escherichia coli Shiga toxin producing stx2

O objetivo deste trabalho foi avaliar, por meio de microscopia óptica e eletrônica de transmissão, as alterações na morfologia e a viabilidade do desenvolvimento de embriões bovinos fecundados com sêmen contaminado experimentalmente à Escherichia coli produtora da toxina shiga stx2 (STEC). Para tanto, oócitos foram aspirados de ovários de vacas abatidas e selecionados para maturação in vitro. Após 20-24 horas de maturação, os oócitos foram divididos em 2 grupos. Sendo o primeiro grupo o controle (n = 418), fertilizado com sêmen testado e sem nenhum tipo de contaminante e o segundo, o grupo contaminado (n = 415), fertilizado com sêmen exposto a STEC. Cada sêmen foi tratado pela técnica de gradiente descontínuo de Percoll. Após o período de fecundação, os embriões foram avaliados quanto a sua morfologia e viabilidade, com o auxílio da microscopia óptica e eletrônica. Na ava liação morfológica, os oócitos fecundados com o sêmen contaminado apresentaram retração citoplasmática, falhas na divisão, assimetria de blastômeros, ooplasma granuloso, coloração castanho-escuro, formação de vacúolos, degeneração e rompimento da zona pelúcida. Essas alterações não foram observadas no grupo controle. A avaliação de todos oócitos incluídos mostrou taxas de clivagem de 70,3 e 52,8%, respectivamente, para embriões controle e contaminado (p = 0,0001). Após o 5° dia de desenvolvimento embrionário foram observadas 44,7% de mórulas no grupo controle e 22,4% no grupo contaminado, apresentando diferença significativa (p=0,0001). A presença da STEC interfere na taxa de clivagem dos embriões e também inviabiliza e provoca queda no desenvolvimento embrionário ao estádio de mórula, além de causar alterações morfológicas durante esse desenvolvimento.(AU)

The objective of this study was to evaluate by optical microscopy and transmission electron, changes in morphology and viability of the development of bovine embryos, fertilized with semen experimentally contaminated (STEC). Oocytes were aspirated from ovaries of slaughtered cows and the intact zona pellucida were selected and matured. After 20-24 hours of maturation, the oocytes were divided into 2 groups. The first, control group (n = 4l8),fertilized with semen tested and without any type of contaminant and the second, the infected group (n = 415), fertilized with sperm exposed to STEC. Both semen were treated by the technique of discontinuous Percoll gradient. After the period of fertilization, embryos were evaluated for their morphology and viability by optical and electron microscopy. In morphologic evaluation, the oocytes fertilized with contaminated semen showed cytoplasmic shrinkage, gaps in the division, asymmetry of blastomeres, ooplasm grainy, dark brown color, vacuoles formation, degeneration and zona pellucid disruption. These changes were not observed in the control group. The cleavage rate was 70.3 and 52.8%, respectively, for control and infected groups, significant differences (p = 0.0001). After the 5th day of embryonic development, where it was observed 44.7% of morula in the control group, and 22.4% in the contaminated group, showing a significant difference (p = 0.0001). The presence of STEC interferes with the cleavage rate of embryos and also prevents and causes a decline in embryonic development to the morula stage and cause morphological changes during this development.(AU)

Light and transmission electron microscopy of generalized dystrophic epidermolysis bullosa (Pasini's albopapuloid subtype) / Microscopia óptica e eletrônica de transmissão da epidermólise bolhosa distrófica generalizada (subtipo albo-papulóide de Pasini)

Pasini's albopapuloid epidermolysis bullosa is a very rare subtype of generalized dystrophic dominant epidermolyis bullosa. A 30 year-old white female patient presented since her childhood disseminated small blisters and papules. Light microscopy of a blister showed dermal-epidermal cleavage; moreover, focal areas of dermal-epidermal splitting were also observed. Transmission electron microscopy also identified focal areas of cleavage, which were seen below the lamina densa. It is important to recognize this condition as a variant of epidermolysis bullosa, since the most important cutaneous findings are generalized papules and not blisters and erosions as in other forms of epidermolysis bullosa.

A epidermólise bolhosa albo-papulóide de Pasini é uma variante rara da forma generalizada de epidermólise bolhosa distrófica dominante. Uma paciente de 30 anos apresenta desde a infância pápulas e bolhas disseminadas. A microscopia óptica de uma bolha demonstrou clivagem dermo-epidérmica; além disso áreas focais de desprendimento dermo-epidérmico foram encontradas. A microscopia eletrônica de transmissão identificou a clivagem abaixo da lâmina densa. É importante que se reconheça essa variante de epidermólise bolhosa, já que o aspecto clínico predominante são pápulas disseminadas e não bolhas como nas outras formas de epidermólise bolhosa.

Pathological findings in fetuses of goats and cattle poisoned by Sida carpinifolia (Malvaceae) / Achados patológicos em fetos de caprinos e bovinos intoxicados por Sida carpinifolia (Malvaceae)

In Brazil, the consumption of Sida carpinifolia by livestock has been associated with neurological diseases linked to lysosomal storage disorders. This paper describes the pathological findings in two caprine fetuses from dams that were experimentally poisoned with S. carpinifolia. The goats were orally dosed with 10 and 13g/kg of a paste of green chopped S. carpinifolia for 30 days and were observed for an additional 15 days period after the last dosage with the plant; thereafter they were euthanized and necropsied. The dams showed only slight clinical signs. The study also includes the findings in one bovine fetus from a naturally S. carpinifolia poisoned cow which showed mild incoordination, generalized tremors, staggering, and frequent falls. The cow was euthanized and necropsied. While there were no significant histopathological changes in the goats, in the cow vacuolation of Purkinje neurons of the cerebellum, pancreatic acinar cells, and thyroid follicular cells were observed. The main microscopic changes observed in the caprine and bovine fetuses were vacuolation in the epithelium of renal tubules, thyroid follicular cells, and Purkinje neurons of the cerebellum. Transmission electron microscopy of sections from CNS of the cow and its fetus revealed vacuoles containing fine granular material surrounded by membrane. Lectin-histochemistry of CNS sections from goat fetuses marked lightly to sWGA lectins, WGA, and Con-A.

No Brasil, o consumo de Sida carpinifolia por animais de produção tem sido associada a doenças neurológicas relacionadas com doença de depósito lisossômico. Este trabalho descreve os achados patológicos observados em dois fetos caprinos de mães que foram experimentalmente intoxicadas por S. carpinifolia. As cabras foram intoxicadas experimentalmente com S. carpinifolia nas doses de 10 e 13g/kg durante 30 dias e foram acompanhadas durante 15 dias após o consumo da planta. Após este período foram eutanasiadas e necropsiadas. O estudo também inclui os achados patológicos encontrados em um feto de uma fêmea bovina intoxicada naturalmente pela planta, que mostrou leve incoordenação, tremores generalizados, andar desequilibrado e quedas frequentes. A vaca foi eutanasiada e necropsiada. Embora não houvesse alterações histológicas significativas nas cabras, vacuolização dos neurônios de Purkinje do cerebelo, das células acinares do pâncreas e nas células foliculares da tireoide foram observadas na vaca. As principais alterações histológicas observadas nos fetos caprinos e no feto bovino foram vacuolização no epitélio dos túbulos renais, nas células foliculares da tireoide e nos neurônios de Purkinje do cerebelo. Na microscopia eletrônica de transmissão do sistema nervoso central da vaca e de seu feto revelaram-se vacúolos contendo material finamente granulado e delimitado por membrana. Na técnica de lectina-histoquímica dos fetos caprinos houve marcação leve no SNC para as lectinas sWGA, WGA e para Con-A.

Experimental poisoning of goats by Ipomoea carnea subsp. fistulosa in Argentina: a clinic and pathological correlation with special consideration on the central nervous system / Intoxicação experimental por Ipomoea carnea subsp. fistulosa em caprinos da Argentina: correlação clínico-patológica, com especial atenção ao sistema nervoso central

Ipomoea carnea subsp. fistulosa, aguapei or mandiyura, is responsible for lysosomal storage in goats. The shrub contains several alkaloids, mainly swansonine which inhibits lysosomal α-mannosidase and Golgi mannosidase II. Poisoning occurs by inhibition of these hydrolases. There is neuronal vacuolation, endocrine dysfunction, cardiovascular and gastrointestinal injury, and immune disorders. Clinical signs and pathology of the experimental poisoning of goats by Ipomoea carnea in Argentina are here described. Five goats received fresh leaves and stems of Ipomoea. At the beginning, the goats did not consume the plant, but later, it was preferred over any other forage. High dose induced rapid intoxication, whereas with low doses, the course of the toxicosis was more protracted. The goats were euthanized when they were recumbent. Cerebrum, cerebellum, medulla oblongata, pons and colliculi, were routinely processed for histology. In nine days, the following clinical signs developed: abnormal fascies, dilated nostrils and abnormal postures of the head, cephalic tremors and nystagmus, difficulty in standing. Subsequently, the goats had a tendency to fall, always to the left, with spastic convulsions. There was lack in coordination of voluntary movements due to Purkinje and deep nuclei neurons damage. The cochlear reflex originated hyperreflexia, abnormal posture, head movements and tremors. The withdrawal reflex produced flexor muscles hypersensitivity at the four legs, later depression and stupor. Abnormal responses to sounds were related to collicular lesions. Thalamic damage altered the withdrawal reflex, showing incomplete reaction. The observed cervical hair bristling was attributed to a thalamic regulated nociceptive response. Depression may be associated with agonists of lysergic acid contained in Ipomoea. These clinical signs were correlated with lesions in different parts of the CNS.

Ipomoea carnea subsp. fistulosa, aguapeí ou mandiyura, causa uma doença de depósito lisossomal em caprinos. A planta contém vários alcalóides, principalmente swansonine, que inibe uma α-mannosidase lisossomal e uma mannosidase II do Golgi. A intoxicação ocorre pela inibição dessas hidrolases. Há vacuolização neuronal, disfunção endócrina, lesões cardiovasculares e gastrointestinais e distúrbios imunológicos. No presente trabalho é descrita a intoxicação experimental por Ipomoea carnea subsp. fistulosa em caprinos da Argentina. Cinco cabras receberam folhas frescas e ramos de Ipomoea. No começo eles não consumiram a planta, mas depois ela foi preferida a qualquer outras forrageiras. Altas doses induziram uma intoxicação rápida, enquanto que com doses baixas demora mais tempo. As cabras foram sacrificadas quando ficavam em decúbito. Cérebro, cerebelo, medula oblonga, ponte e colículos foram processados rotineiramente para histologia. Aos nove dias, encontramos: fascie anormal, narinas dilatadas, posturas anormais da cabeça, tremores cefálicos e nistagmo, dificuldade para permanecer na estação. Posteriormente, presentearam a tendência de queda, sempre à esquerda, com convulsões espásticas. Os neurônios de Purkinje e os os núcleos profundos foram danificados. Como conseqüência, emergiu a falta de coordenação de movimentos voluntários. A hiper-reflexo coclear originou postura anormal, movimentos de cabeça e tremores. A retirada produz reflexos hipersensibilidade nos flexores dos quatro membros, depois depressão e letargia. As respostas anormais estão ligadas a lesões do colículo. Injurias no tálamo alteram o reflexo de retirada, mostrando uma reação incompleta. Os pelos eriçados da região cervical podem representar uma resposta nociceptiva também regulada pelo tálamo. A depressão pode estar associada com agonistas do ácido lisérgico presentes na Ipomoea. Esses sintomas estão relacionados com lesões em diferentes partes do SNC.

Platelet activation: ultrastructure and morphometry in platelet-rich plasma of horses / Ativação plaquetária: ultraestrutura e morfometria no plasma rico em plaquetas de equinos

This study was conducted to investigate the activation ability of the platelet-rich plasma (PRP) by pharmacological agents, as well as to verify the need or not of this activation for therapeutic use. The PRP was obtained from four healthy crossbred geldings aged 13 to 16 years (15±1years), and was processed for observation and quantification of the platelet morphology by using the transmission electron microscopy. All PRP samples were activated with 10 percent calcium chloride (CaCl2) solution, pure bovine thrombin or associated with CaCl2. The control (pure PRP) was not pharmacologically activated. In the pure PRP samples, 49 percent of the platelets were classified as state of activation uncertain, 41 percent as resting, 9 percent as fully activated and 1 percent as irreversibly damaged. Treatment with 10 percent CaCl2 provided a distribution of 54 percent platelets in state of activation uncertain, 24 percent as fully activated, 20 percent as resting, and 2 percent as irreversibly damaged. The platelet morphology of the bovine thrombin treated samples did not fit into classification adopted, as showing irregular shape with emission of large filamentous pseudopods, appearance of ruptured and whole granules in the remaining cytoplasm and extracellular environment. There was effect of the treatment on the platelet morphology (P=0.03). The 10 percent CaCl2 is an adequate platelet-activating agent. However, in cases the use of PRP under its liquid form is necessary, the use of pure PRP is recommended, since besides presenting an adequate percentage of fully activated platelets it also has significant amount of the resting type, which can be activated by substances found in the injured tissue.

O objetivo desse estudo foi investigar a capacidade de ativação do plasma rico em plaquetas (PRP) por substâncias farmacológicas, assim como verificar a necessidade ou não dessa ativação para uso terapêutico. O PRP foi obtido de quatro equinos mestiços hígidos, machos castrados, com 13 a 16 anos (15±1anos) de idade, e processado para observação e quantificação da morfologia plaquetária mediante a utilização da microscopia eletrônica de transmissão. Todas as amostras de PRP foram ativadas com cloreto de cálcio (CaCl2) a 10 por cento, trombina bovina pura ou associada a CaCl2. O controle (PRP puro) não foi ativado farmacologicamente. Nas amostras de PRP puro, 49 por cento das plaquetas foram classificadas como ativação incerta, 41 por cento em repouso, 9 por cento totalmente ativada e 1 por cento com dano irreversível. O tratamento com CaCl2 a 10 por cento proporcionou uma distribuição de 54 por cento de plaquetas com ativação incerta, 24 por cento totalmente ativada, 20 por cento em repouso, e 2 por cento como com dano irreversível. Amostras tratadas com trombina bovina apresentaram morfologia plaquetária que não se enquadraram na classificação adotada, apresentando forma irregular com emissão de grandes pseudópodes filamentosos, aspecto de rompimento e grânulos inteiros no citoplasma remanescente e meio extracelular. Houve efeito do tratamento sobre a morfologia plaquetária (P=0,03). O CaCl2 a 10 por cento é um adequado agente ativador de plaquetas. Entretanto, nos casos onde se faz necessário o uso de PRP na forma mais líquida, recomenda-se o uso do PRP puro, que além de apresentar uma adequada porcentagem de plaquetas totalmente ativadas, também possui importante quantidade do tipo em repouso, que pode ser ativado por substâncias presentes no tecido lesionado.

Classical Ehlers-Danlos syndrome: clinical, Histological and ultrastructural aspects / Síndrome de Ehlers-Danlos clássica: aspectos clínicos, histológicos e ultraestruturais

A 12-year-old boy with difficulty in wound healing and scars of unusual appearance was examined. Thin, shiny and protruding skin, characterizing pseudotumoral lesions, was observed on his knees and elbows. Loose joints and increased skin elasticity were also observed. Light microscopy showed rare collagen bundles and loosely dispersed collagen fibers. Irregularly distributed elastic tissue was observed, and transmission electron microscopy revealed disorganized collagen fibers. In cross sections under high magnifications, fibers of varying diameters could be seen, as well as an irregular fiber outline. Scanning electron microscopy of the dermis showed disorganized collagen fibers, which were rarely arranged in bundles. Isolated and crossed-over fibers were also found.

Paciente masculino de 12 anos relatou dificuldade em cicatrizar, seguido por cicatrizes de aspecto infrequente . A pele dos joelhos e cotovelos é fina, brilhante e protrusa, caracterizando pseudo- tumores. Além disso apresenta hiperelasticidade cutânea e articular. A microscopia óptica demonstrou raros feixes colágenos, as fibras colágenas encontram-se dispersas. O tecido elástico está presente e secundariamente irregular. A microscopia eletrônica de transmissão também observou fibras colágenas desorganizadas e com cortes transversais em grande aumento evidenciou diâmetros variados e contorno irregular das mesmas. A microscopia eletrônica de varredura da derme demonstrou raros feixes colágenos e fibras colágenas isoladas e entrecruzadas.

Doença do armazenamento lisossomal induzida pelo consumo de Sida carpinifolia em bovinos do Rio Grande do Sul / Lysosomal storage disease caused by Sida carpinifolia in cattle in Rio Grande do Sul

This paper reports the natural poisoning by Sida carpinifolia (guanxuma, chá-da-índia) in cattle in Rio Grande do Sul, Brazil. Five cattle were affected in the period 2001-2008. Clinical signs included weight loss, incoordination, walking difficulty, generalized tremors, frequent falls, and death. Microscopically, the main changes were vacuolation of Purkinje neurons in the cerebellum, pancreatic acinar cells, and thyroid follicular cells. Transmission electron microscopy revealed vacuoles bordered by membrane containing finely granular material. Lectin histochemistry showed positive staining in neurons with the lectins Concanavalia ensiformis (Con-A), Triticum vulgaris (WGA), and Succinyl Triticum vulgaris (sWGA).

Relata-se a intoxicação natural por Sida carpinifolia (guanxuma, chá-da-índia) em bovinos no Rio Grande do Sul. Foram afetados cinco bovinos no período 2001-2008. O quadro clínico foi caracterizado por emagrecimento, incoordenação, dificuldade de locomoção, tremores generalizados, quedas frequentes e morte. Microscopicamente, as principais alterações foram vacuolização dos neurônios de Purkinje do cerebelo, das células acinares do pâncreas e das células foliculares da tireoide. A microscopia eletrônica evidenciou vacúolos com conteúdo finamente granulado e delimitado por membrana. Na lectina-histoquímica, observou-se marcação em neurônios com as lectinas Concanavalia ensiformis (Con-A), Triticum vulgaris (WGA) e Succinyl Triticum vulgaris (sWGA).

Pathophysiology of enteroaggregative Escherichia coli infection: an experimental model utilizing transmission electron microscopy / Fisiopatologia da infecção pela Escherichia coli enteroagregativa: um modelo experimental utilizando microscopia eletrônica de transmissão

CONTEXT: Enteroaggregative Escherichia coli strains have been associated with persistent diarrhea in several developing countries. In vivo procedures with animal models as rat, rabbit and gnotobiotic piglets intestinal loops, in vitro assays with cellular lines like T84, Caco 2, HT29, HeLa e HEp-2 and in vitro organ culture with intestinal fragments have been applied to study these bacteria and their pathogenicity. OBJECTIVES: The present experimental research assessed the pathogenic interactions of three enteroaggregative Escherichia coli strains, using the in vitro organ culture, in order to observe and compare alterations in different regions of both, the ileal and the colonic mucosa. METHODS: This study applied intestinal fragments from terminal ileum and colon that were excised from pediatric and adult patients that underwent colonoscopic procedures. Tissue was fixed for transmission electron microscopic study. Each bacterium was tested with three intestinal fragments for each region. RESULTS: Enteroaggregative Escherichia coli strains colonized and provoked citotoxic effects in the ileal and colonic mucosa. Total or partial villi destruction, vacuolization of basal cytoplasm of the enterocytes, epithelium detachment, derangement of the structure and epithelial cell extrusion in ileal mucosa could explain the perpetuation of the diarrhea. Bacterial aggregates were seen in intestinal lumen associated with mucus and cellular debris and in the intercellular spaces of the destroyed epithelium, suggesting bacterial invasion that seemed to be secondary to the destruction of the tissue. CONCLUSIONS: Pathogenesis of persistent diarrhea should include alterations in the small bowel structures where the digestive-absorptive functions take place. In the colonic mucosa the inflammatory lesions could explain the occurrence of colitis.

CONTEXTO: A Escherichia coli enteroagregativa está associada à diarréia persistente em vários países em desenvolvimento. Procedimentos in vivo empregando modelos animais como ratos, coelhos e alças intestinais de suínos gnotobióticos, e modelos in vitro com linhas celulares, tais como: T84, Caco 2, HT29, HeLa e HEp-2 e cultura de órgão in vitro são empregados no estudo desta bactéria e de sua patogenicidade. OBJETIVOS: Neste trabalho foram avaliadas as interações de três cepas de Escherichia coli enteroagregativa usando cultura de órgão in vitro, com o objetivo de observar e comparar as alterações em diferentes regiões do intestino: mucosa ileal e mucosa colônica. MÉTODOS: Este estudo empregou fragmentos de íleo terminal e cólon extraídos de pacientes submetidos a colonoscopia. Os fragmentos intestinais infectados in vitro foram fixados para avaliação em microscopia eletrônica de transmissão. Cada cepa bacteriana foi testada com três fragmentos intestinais de cada região. RESULTADOS: As cepas estudadas colonizaram e provocaram efeitos citotóxicos no íleo e no cólon. Alterações na mucosa ileal, tais como: destruição parcial ou total das vilosidades, vacuolização do citoplasma basal dos enterócitos, destacamento do epitélio e desarranjo da estrutura com extrusão de células epiteliais poderiam explicar a perpetuação do processo diarréico. Agregados bacterianos foram vistos no lúmen intestinal associados a muco e restos celulares e nos espaços intercelulares do epitélio destruído sugerindo invasão bacteriana que pareceu ser secundária à destruição do tecido. CONCLUSÃO: A patogênese da diarréia persistente deve incluir alterações no intestino delgado aonde ocorrem as funções digestivo-absortivas. Na mucosa colônica as lesões inflamatórias observadas justificariam a ocorrência de colite.

Ultra-estrutura do músculo vocal denervado mecanicamente em suínos (sus scrofa domestica) / Ultra structure of the denervated vocal muscle mechanically in hogs (sus scrofa domestica)

Introdução: A literatura não é clara nas manifestações ultra-estruturais das pregas vocais após lesão neural. Objetivo: Verificar as alterações que ocorrem numa prega vocal mecanicamente denervada. Método: Neste estudo prospectivo, foram utilizados 15 suínos de raça comercial (Sus scrofa domestica), com idade de 4 a 12 semanas. Os animais foram distribuídos em três grupos, escolhidos aleatoriamente. Todos foram submetidos à denervação da prega vocal direita, com remoção cirúrgica de um segmento com três centímetros do nervo laríngeo recorrente direito. Após 45, 90 e 180 dias das operações, procedeu-se a biópsia dos músculos vocais, processaram-se as amostras para microscopia eletrônica de transmissão e, para o estudo ultra-estrutural, utilizou-se o microscópio eletrônico de transmissão Philips, modelo EM208S. Resultado: Os grupos biopsiados com 45 e 90 dias após a operação de denervação mecânica, apresentaram desorganização miofibrilar, linhas Z somente vestigiais em muitas amostras, bem como mitocôndrias alteradas apresentando tamanhos reduzidos, e matriz mitocondrial rarefeita com raras cristas mitocondriais presentes. O grupo biopsiado com 180 dias após a operação de denervação, apresentou sarcômeros regulares, mitocôndrias com tamanhos e número regulares com posicionamento correto entre as unidades sarcoméricas. Conclusão: Os achados na ultra-estrutura dos músculos vocais sugerem a reinervação do músculo sendo que as mitocôndrias musculares foram as estruturas mais sensíveis à condição denervada, seguidas pela citoarquitetura das miofibrilas; os achados na ultra-estrutura dos músculos vocais sugere a reinervação do músculo no período de aproximadamente seis meses.

Introduction: The literature is not clear in the ultra-structural manifestations of the vocal wrinkles after neural wound. Objective: To verify the alterations that occur in a vocal fold mechanically denervated. Method: In this prospective study, it were utilized 15 hogs of commercial race (Sus scrofa domesticates), with age of 4 to 12 weeks. The animals were distributed in three groups, chosen at random. Everybody was submitted to the denervation of the right vocal fold, with surgical removal of a segment with three centimeters of the recurring right laryngeal nerve. After 45, 90 and 180 days of the operations, it was proceeded the biopsy of the vocal muscles, it was prosecuted the samples for transmission electron microscopy and, for the ultra-structural study, utilized the transmission electron microscopy Philips, model EM208S. Results: The biopsied groups with 45 and 90 days after operation of mechanical denervation, presented disorganization miofibrilar, only vestigial lines Z in many samples, as well like altered mithochondrions presenting limited sizes, and matrix mithocondrial rarefied with rare mithocondrial cristae present. The biopsied group with 180 days after operation of denervation, presented regular sarcomeres, mithocondrions with sizes and regular number with correct positioning between the sarcomerical units. Conclusion: The finds in the ultra-structure of the vocal muscles suggest to re enervation of the muscle being that the muscular mithochondrions were the most sensible structures to the denervated condition, successions by the cytoarchiteture of the miofibrilas; the finds in the ultra-structure of the vocal muscles suggests to reinervation of the muscle in the period of approximately six months.

Histological study of the dynamics in epidermis regeneration of the carp tail fin (Cyprinus carpio, Linnaeus, 1758) / Estudo histológico da dinâmica da regeneração da epiderme da nadadeira caudal da carpa (Cyprinus carpio Linnaeus, 1758)

Teleostean fins when partially amputated suffer a regenerative process called epimorphic regeneration, characterized by the following stages: healing, based on the formation of a multistratified epidermal layer, the formation of a mass of pluripotent cells known as blastema, the differentiation of these cells, the synthesis and disposition of the extracellular matrix, morphological growth and restoration. The epidermis has a fundamental role in the regenerative process of fish fins, as the healing time of this structure leads it to a faster regenerative process and it also works as a defense against the external environment. In this sense, due to the fast regeneration shown by the epidermis, the aim of this paper is to study the histology of the regenerative dynamics of the carp fin tail (Cyprinus carpio), under the light and transmission electron microscope. Epidermic regeneration begins right in the first hours after the fin amputation and it continues throughout the regenerative process. After 24 hours, an apical epidermal cap is established. Cytoplasmatic prolongations and intercellular junctions are observed and the cells of the basal layer of the epidermis change from the cubic form to the cylindrical, due to the development of the cytoplasmatic organelles responsible for the synthesis of the basal membrane, lost after amputation. These results show the importance of histological studies in regenerative processes. We believe that the association of molecular biology with histological studies can throw further light onto these regenerative dynamics.

As nadadeiras dos teleósteos, quando parcialmente amputadas, sofrem um processo de regeneração chamado de regeneração epimórfica, caracterizado pelas seguintes fases: cicatrização, a partir da formação de uma capa epidermal multiestratificada, formação de uma massa de células mesenquimais multipotentes chamada blastema, diferenciação dessas células, síntese e deposição de matriz extracelular, crescimento e restauração morfológica. A epiderme tem papel fundamental no processo regenerativo das nadadeiras dos peixes, uma vez que a velocidade de cicatrização dessa estrutura leva a um processo regenerativo mais rápido e, também, age como uma defesa contra o ambiente externo. Assim, devido à rápida regeneração que a epiderme apresenta, tivemos como objetivo, neste trabalho, estudar a histologia da dinâmica regenerativa da epiderme das nadadeiras caudais da carpa (Cyprinus carpio) ao microscópio de luz e eletrônico de transmissão. A regeneração da epiderme tem início já nas primeiras horas após a amputação das nadadeiras e continua durante todo o processo regenerativo. Após 24 horas, uma capa epidermal apical é estabelecida. Prolongamentos citoplasmáticos e junções intercelulares são observados e as células da camada basal da epiderme passam da forma cúbica para a cilíndrica, devido ao desenvolvimento das organelas citoplasmáticas responsáveis pela síntese da membrana basal perdida após a amputação da nadadeira. Estes resultados mostram a importância de estudos histológicos em processos regenerativos. Acreditamos que a associação da biologia molecular a estes estudos histológicos poderá elucidar ainda melhor esta dinâmica regenerativa.

Enterocyte ultrastructural alterations following intestinal obstruction in rats / Alterações ultra-estruturais do enterócito após obstrução intestinal em ratos

PURPOSE: To analyze the small intestinal mucosa ultrastructure, and to characterize the enterocyte lesion severity caused by mechanical intestinal obstruction combined or not with an ischemia of the mesenteric marginal vessels arch. METHODS: It was used 47 Wistar rats divided into 4 groups as follows: Group 1- Control rats (C), Group 2- sham rats (S), Group 3- rats submitted to intestinal obstruction excluding marginal vessel (OEV), Group 4- Intestinal obstruction including marginal vessels (OIV). Rats of groups 3 and 4 were allotted into two subgroups for the removal of small intestinal tissue samples, one at the proximal (P), and the other at the distal (D) segments from the obstruction site. Samples of groups 2, 3, 4 were obtained 24, 48, and 72 hours after post operation care. Small intestinal tissue samples of group 1 were excised following laparotomy. Imaging in Light and Transmission Electronic Microscopy were used for morphological and morphometric studies. The results were analyzed by using the ANOVA and Newman-Keuls tests. RESULTS: No irreversible lesion was observed. In the 24 hours microvilli volume of group 3 turned down at the proximal site henceforth enlarging very slowly within the next 72 hours. At the distal site significant microvilli shrinkage was observed up to 48 hours. Then they recovered their volume after 72 hours. In the 24 hours microvilli volume of group 4 grew twice in comparison with the microvilli of group 1 rats but after 72 hours there was drastic volume shrinkage, shape alterations, and severe flatness, especially in the distal segments of the obstruction site. CONCLUSIONS: Terminal ileum mechanical obstruction with mesenteric marginal arch ischemia led to reversible ultrastructural alterations after 72 hours, and the injury is proportional to the persistence of the obstructive process. Furthermore the mesenteric vessels of the marginal arcade play an important role in the maintenance of mucosal integrity, ...

OBJETIVO: Analisar as alterações ultra-estruturais da mucosa do intestino delgado e caracterizar a severidade das lesões causadas por uma obstrução intestinal mecânica, associada ou não a isquemia da arcada marginal mesentérica. MÉTODOS: Foram utilizados 47 ratos, da linhagem Wistar, distribuídos em quatro grupos, da seguinte forma: Grupo 1 - Controle (C), Grupo 2- Simulação (S), Grupo 3- Ratos com obstrução intestinal sem inclusão de vaso marginal (OEV), Grupo 4 - Obstrução intestinal com inclusão de vaso marginal (OIV). Os animais dos grupos 3 e 4 foram redistribuídos em dois subgrupos com coleta de amostras do intestino delgado, à montante (P) e à jusante (D) do ponto de obstrução. Nos grupos 2, 3 e 4, as amostras foram colhidas com 24, 48 e 72 horas de pós-operatório. No grupo 1, este material foi retirado após laparotomia. Realizaram-se estudos morfológicos e morfométricos dos microvilos através das Microscopias Óptica e Eletrônica de Transmissão. Os resultados foram analisados mediante os testes estatísticos de ANOVA e Newman-Keuls. RESULTADOS: Não foram observadas lesões irreversíveis. No grupo 3 com 24 horas, o volume dos microvilos diminuiu, à montante, com discreto aumento em 72 horas. Á jusante, houve redução significante até 48 horas, com recuperação em 72 horas. No grupo 4, o volume dos microvilos quase dobrou em relação ao grupo 1, com 24 horas, mas reduziu-se, drasticamente, em especial à jusante, com 72 h de evolução, apresentando deformidade e achatamento severos, achados estes estatisticamente significantes. CONCLUSÕES: A obstrução intestinal mecânica do íleo terminal, associada ou não a isquemia da arcada mesentérica marginal, causa alterações ultra-estruturais reversíveis dos enterócitos, cuja gravidade é diretamente proporcional à duração do processo mórbido obstrutivo, até 72 horas de evolução. Aduz-se que, os vasos mesentéricos da arcada marginal exercem um papel relevante na preservação da mucosa intestinal, na ...

Toxicidade da mitomicina C ao endotélio da córnea de coelhos / Mitomycin C toxicity in rabbit corneal endothelium

OBJETIVO: Avaliar alterações do endotélio corneano após aplicação de mitomicina C na esclera por meio de microscopia eletrônica de transmissão e de varredura e correlacionar as alterações com tempo, concentração e entre os dois métodos de avaliação. MÉTODOS: Foi avaliado o endotélio corneano dos olhos de 32 coelhos albinos distribuídos em 4 grupos experimentais com 8 coelhos cada um. A mitomicina C foi aplicada sob retalho escleral no olho direito por 5 minutos. Nos grupos G1 e G2 a concentração da mitomicina C foi de 0,5 mg/ml e nos grupos G3 e G4 a concentração foi de 0,2 mg/ml. O exame foi realizado com 15 dias após nos grupos G1 e G3 e com 30 dias nos grupos G2 e G4. Dos 8 animais 4 foram preparados para microscopia eletrônica de transmissão e 4 para microscopia eletrônica de varredura. Os olhos esquerdos de todos animais serviram como controle. RESULTADOS: À microscopia eletrônica de transmissão foram observadas alterações do endotélio corneano em todos os grupos experimentais: rarefação do citoplasma, dilatação e fragmentação das cisternas do retículo endoplasmático rugoso, aparelhos de Golgi com dilatação das cisternas, redução de vacúolos e irregularidades da membrana celular interna sendo mais intensas em G1 e G2. À microscopia eletrônica de varredura foram observadas alterações em todos grupos experimentais, exceto G1: alteração de forma e tamanho das células e projeções filopoidais mais longas. CONCLUSÕES: 1 - A mitomicina C causou alteração no endotélio da córnea tanto na concentração de 0,5 mg/ml como de 0,2 mg/ml observadas 15 e 30 dias após a aplicação; 2 - As alterações foram mais intensas com a maior concentração de mitomicina C (0,5 mg/ml) na microscopia eletrônica de transmissão e não na microscopia eletrônica de varredura; 3 - As alterações tiveram correlação com o tempo na microscopia eletrônica de varredura e não na microscopia eletrônica de transmissão.

PURPOSE: To evaluate corneal endothelium alterations after applying mitomycin C to the sclera using transmission and scanning electron microscopy, correlating alterations with time, concentration, and evaluation methods. METHODS: The corneal endothelium of both eyes of 32 albino rabbits was evaluated and distributed into four groups of 8. Mitomycin C was applied under a scleral flap in the right eye for 5 minutes. Mitomycin C concentrations were 0.5 mg/ml for G1 and G2 and 0.2 mg/ml for G3 and G4. Examinations were performed 15 days after application to G1 and G3, and 30 days after application to G2 and G4. Four cornea in each group were prepared for transmission electron microscopy and four for scanning electron microscopy. Left eyes of all animals were used as controls. RESULTS: Transmission electron microscopy showed corneal endothelium alterations in all groups: rarefied cytoplasm, dilation and fragmentation of rough endoplasmic reticulum cisternae, Golgi apparatus with cisternal dilation, reduced vacuoles, and irregularities of internal membrane more noticeable in G1 and G2. Scanning electron microscopy revealed alterations in all groups except G1: changes in the shape and size of cells and longer filopodial projections. CONCLUSIONS: 1 - Corneal endothelium alterations were seen at both 0.5 and 0.2 mg/ml concentrations and at 15 and 30 days after mytomicin C application; 2 - Alterations were more intense with higher mytomicin C concentration by transmission electron but not by scanning electron microscopy; 3 - The alterations correlated with time by scanning electron microscopy but not by transmission electron microscopy.

In vitro safety assessment of papain on human skin: A qualitative Light and Transmission Electron Microscopy (TEM) study / Avaliação in vitro da segurança de uso da papaína em pele humana: Estudo qualitativo por microscopia de luz e eletrônica de transmissão (MET)

Papain is a thiol proteolytic enzyme widely used in dermatology that found applications in wound treatment. Recently, papain was also used as absorption enhancer which can modify the peptide/protein material in the bilayer domain. We investigated papain safety using human skin that was exposed to papain in vitro at different times: 4, 24 and 48 hours. The samples were examined using Light and Transmission Electron Microscopy (TEM) to study of the mechanisms involved in enhancer-skin interaction. After 24 hours, changes occurred in corneosomes. However, samples of 48 hours did not show major changes in agreement with the control. These findings indicated that papain could be used safely onto the skin.

Papaína é uma enzima proteolítica amplamente utilizada na dermatologia para o tratamento de feridas. Atualmente, a papaína também tem sido empregada como promotor de absorção cutânea passível de modificar os domínios protéicos da epiderme. Nesta pesquisa investigou-se in vitro a segurança da papaína, utilizando pele humana exposta a enzima em diferentes períodos de tempo de contato: 4, 24 e 48 horas. As amostras foram avaliadas por Microscopia de Luz e Eletrônica de Transmissão (MET), técnicas que podem ser utilizadas no estudo dos mecanismos envolvidos na interação de promotores de absorção cutânea e a pele. Após 24 horas de contato entre a pele a solução de papaína, mudanças ocorreram nos corneossomos, no entanto, as amostras em contato por 24 horas não evidenciaram alterações relevantes comparadas com o controle. Os resultados indicaram que a papaína poderia ser seguramente aplicada sobre a pele.

Differences in the cell wall architecture of melanin lacking and melanin producing Cryptococcus neoformans clinical isolates from India: an electron microscopic study

Cryptococcus neoformans is an important opportunistic fungal pathogen that causes life-threatening infection of the central nervous system. A major virulence factor for C. neoformans is the production of melanin in the cell wall. Using transmission electron microscopy, we studied the cell walls of three pairs of isolates obtained from patients with dual cryptococcal infections, where a melanotic and an albino strain were isolated from the CSF of each patient. Transmission Electron Microscopy revealed that the albino strains lacked a melanin layer whereas a melanin layer was associated with the cell wall of the melanotic strains, comprising approximately 75 percent of the cell wall area. The cell wall size of the melanin producing cells was approximately double the size the albino isolates' cell walls (p value <= 0.003). In this study TEM revealed that the differences in the ultrastructure of the melanin lacking and melanin producing isolates were associated to the cell wall and the melanin layer.

Cryptococcus neoformans é um importante fungo oportunista patogênico que causa infecção no sistema nervoso central, e que pode levar o paciente à morte. Um dos principais fatores de virulência do C. neoformans é a produção de melanina na parede celular. Utilizando microscopia eletrônica de transmissão, nós estudamos as paredes celulares de três pares de isolados obtidos de pacientes com dupla infecção pelo fungo, onde um isolado melanizado e um albino foram isolados do líquor de cada paciente. A microscopia eletrônica de transmissão revelou que as cepas albinas não apresentavam a camada de melanina enquanto que uma camada de melanina estava associada com a parede celular de cepas melanóticas, constituindo aproximadamente 75 por cento da área da parede celular. O tamanho da parede celular das células produtoras de melanina foi aproximadamente o dobro do tamanho da parede celular dos isolados albinos (p < 0,003). Neste estudo, a microscopia eletrônica de transmissão revelou que as diferenças na estrutura dos isolados albinos sem melanina e dos isolados produtores de melanina estava associada à parede celular e a camada de melanina.